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Detecção de dsRNAs rápida e versátil: ferramenta para controle de qualidade de transcrito mRNA

No processo de produção do mRNA por transcrição in vitro, os níveis de impureza (dsRNA) precisam ser rigorosamente monitorados para garantir a expressão eficiente do mRNA e reduzir o risco de alta imunogenicidade.  
  
O anticorpo monoclonal anti-dsRNA J2 pode ser utilizado com sucesso em vários ensaios de dotblot para a detecção rápida e fácil de dsRNA, tanto em misturas de transcrição in vitro quanto em soluções puras de mRNA 1-6.
  
Os diferentes anticorpos monocloanis da SCICONS®, como K1 e K2, podem ainda ser utilizados para identificação de dsRNA em cultura de células e tecidos (como amostras de FFPE), para caracterização e detecção de vírus com genomas dsRNA ou intermediários (incluindo SARS, Hepatite C, Dengue ou Vírus do Nilo Ocidental) e como ferramenta de diagnóstico para determinar se um patógeno desconhecido é de origem viral ou bacteriana. 

Figura 1: Ensaio de dotblot com anticorpo monoclonal J2 anti-dsRNA para a detecção de dsRNA (Moradian et al., 2022).

[1] Kariko et al. (2005) Suppression of RNA Recognition by Toll-like Receptors: The Impact of Nucleoside Modification and the Evolutionary Origin of RNA. Immunity 23 (2):165.
[2] Kariko et al. (2008) Incorporation of Pseudouridine yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability. Molecular Therapy 16 (11):1833.
[3] Baiersdörfer et al. (2019) A Facile Method for the Removal of dsRNA Contaminant form In Vitro-Transcribed mRNA. Mol Ther Nucleic Acids 15:26.
[4] Moradian et al. (2022) Chemical modification of uridine modulatesmRNA-mediated profinflammatory and antiviral response in primary human macrophages. Mol Ther Nucleic Acids 27:854.
[5] Piao et al. (2022) Double-stranded RNA reduction by chaotropic agents during in vitro transcription of messenger RNA. Mol Ther Nucleic Acids 26:618.
[6] Schönborn et al. (1991) Monoclonal antibodies to double-stranded RNA as probes of RNA structure in crude nucleic acid extracts. Nucleic Acids Res. 19:2993.


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