Controle de nuclease: simples como deve ser!

Nucleases, como RNases e DNases, são enzimas capazes de clivar ligações fosfodiéster de ácidos nucleícos (RNA, ss- ou ds-DNA). Devido à sua onipresença no meio ambiente, as nucleases representam um risco de contaminação especialmente para aplicações biológicas moleculares como PCR.
A Cellco oferece ferramentas de teste de contaminação tanto para a identificação combinada de RNase+DNase (PP-409) quanto somente de DNase (PP-410), que detectam uma quantidade mínima (Fig. 1) de RNase A (0,2 pg/µl) e/ou DNase I (1x10^-5U/µl). As master mixes já estão prontas para uso e vêm com um protocolo simples para uma análise rápida e simultânea (multiplex) com base em sondas de RNA (FAM) e DNA (JOE) marcadas como corantes repórteres.
Os kits permitem detecção em termocicladores de PCR em tempo real ou leitores de fluorescência comuns.

Figura 1: a) Avaliação cinética da atividade da DNase I monitorada no sistema de PCR em tempo real QuantStudio 5 (ThermoFisher). A concentração dos padrões de DNase I são 1 x 10^-5U/µl e 5 x 10^-5U/µl. Água de grau PCR é usada para controle negativo.
b) Avaliação cinética da atividade da RNase A monitorada no sistema de PCR em tempo real QuantStudio 5 (ThermoFisher). A concentração de padrões de RNase A é de 0,2 pg/µl e 1,0 pg/µl. Água de grau PCR é usada para controle negativo