Detecção por EvaGreen para Genotipagem/ High Resolution Melt (HRM)

A linha Cellco de qPCR GreenMaster foi projetada para análise quantitativa em tempo real de amostras de DNA, incluindo análise de curva de fusão de alta resolução (HRM). As misturas contêm todos os reagentes necessários para qPCR (exceto modelo e primers) em uma solução pré-misturada 2x concentrada pronta para uso. As misturas são recomendadas para aplicações de PCR de rotina, PCR de alto rendimento ou genotipagem e proporcionam maior especificidade e sensibilidade ao amplificar alvos com baixo número de cópias ou ao trabalhar com fundos complexos. O corante de DNA fluorescente EvaGreen® se intercala no produto de amplificação durante o processo de PCR e permite a quantificação direta do DNA alvo sem a necessidade de sondas marcadas específicas da sequência (por exemplo, sondas TaqMan®).

A análise de High Resolution Melting (HRM) é uma ferramenta poderosa para a detecção de mutações, polimorfismos e diferenças epigenéticas em amostras de DNA. É uma alternativa rápida e econômica a outras tecnologias de genotipagem.

A enzima UNG (Uracil-N-Glycosylase) elimina a contaminação cruzada de DNA de reações anteriores de PCR. Um tratamento com UNG no início do ciclo térmico remove os resíduos de uracil do DNA contendo dU e impede que ele sirva como modelo.

O corante de referência ROX não participa da reação de PCR, mas permite a normalização da variação de sinal não relacionada à PCR.

O corante de DNA fluorescente EvaGreen® é um corante intercalador de DNA especialmente desenvolvido para aplicações de análise de DNA, incluindo PCR em tempo real (qPCR) e análise de curva de fusão de DNA de alta resolução (HRM). Ao se ligar ao DNA, o corante não fluorescente torna-se altamente fluorescente e não apresenta inibição detectável no processo de PCR. O corante é extremamente estável tanto termicamente quanto hidroliticamente, proporcionando praticidade durante o manuseio de rotina.

EvaGreen® é uma marca registrada e licenciada para venda pela Biotium, Inc., Hayward, CA, EUA.
SYBR® é uma marca registrada da Invitrogen Corporation, Carlsbad, Califórnia, EUA.